
以下是适用于大多数Co-IP实验的通用裂解液配方(适用于哺乳动物细胞):
不同实验场景的优化方案
膜蛋白/跨膜蛋白
磷酸化蛋白研究
核蛋白复合物
低丰度蛋白检测
植物/真菌样本
关键操作注意事项
温度控制:全程冰上操作,裂解液预冷至4℃。
裂解时间:温和裂解(如NP-40体系)需15-30分钟;强裂解(含SDS)不超过10分钟。
离心条件:4℃下14,000×g离心10分钟,去除不溶物。
分装保存:裂解产物立即使用或-80℃分装(避免反复冻融)。
疑难问题解答
Q
裂解液出现浑浊或沉淀?
原因:去垢剂或盐浓度过高导致蛋白聚集。
解决:降低NP-40至0.2%,或改用CHAPS(0.5%-1%)
Q
WB检测到大量降解条带?
原因:蛋白酶未完全抑制。
解决:除了PMSF,需要添加更广谱蛋白酶抑制剂。
Q
IP后洗脱效率低?
优化:洗脱缓冲液改用0.1 M甘氨酸(pH 2.8)+ 0.1% SDS,洗脱后立即中和(1 M Tris-HCl, pH 8.5)。
七纯生物
将上新全系列IP凝胶与磁珠产品
敬请期待!!!
待上新
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