干货|Co-IP实验裂解液配方解析及优化方案

类别: 新闻资讯 日期: 2025-03-03 作者: Editor

以下是适用于大多数Co-IP实验的通用裂解液配方(适用于哺乳动物细胞):

 

 

 

不同实验场景的优化方案

 

 

 

 

 

膜蛋白/跨膜蛋白

 

 

 
 

磷酸化蛋白研究

 

 
 

核蛋白复合物

 

 

 
 

低丰度蛋白检测

 

 

 
 

植物/真菌样本

 

 

 

 

关键操作注意事项

 

温度控制全程冰上操作,裂解液预冷至4℃。

 

 

裂解时间:温和裂解(如NP-40体系)需15-30分钟;强裂解(含SDS)不超过10分钟。

 

离心条件:4℃下14,000×g离心10分钟,去除不溶物。

 

分装保存:裂解产物立即使用或-80℃分装(避免反复冻融)。

 

疑难问题解答

 

Q

 

裂解液出现浑浊或沉淀?

原因:去垢剂或盐浓度过高导致蛋白聚集。

解决:降低NP-40至0.2%,或改用CHAPS(0.5%-1%)

Q

WB检测到大量降解条带?

原因:蛋白酶未完全抑制。

解决:除了PMSF,需要添加更广谱蛋白酶抑制剂。

Q

IP后洗脱效率低?

优化:洗脱缓冲液改用0.1 M甘氨酸(pH 2.8)+ 0.1% SDS,洗脱后立即中和(1 M Tris-HCl, pH 8.5)。

 

 

七纯生物

将上新全系列IP凝胶与磁珠产品 

敬请期待!!!

 

 

 

 

待上新

 
 

 

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