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本文章主要针对Co-IP实验常见问题之实验无信号（无目的条带）的原因与解决方案，可导致Co-IP实验无信号（无目的条带）的原因包括：可能的原因包括抗体问题、蛋白未正确表达、裂解条件不当等。解决方案需要针对这些原因，比如验证抗体特异性、优化裂解缓冲液、增加蛋白酶抑制剂等。
01.
抗体失效
一抗或二抗效价降低、储存条件不当（反复冻融或未避光保存）
解决方案
抗体活性验证：使用Western Blot验证一抗对靶蛋白的识别能力（阳性对照样本需包含已知表达的靶蛋白）
分装保存：抗体按单次用量分装，避免反复冻融（推荐使用含50%甘油的保存液，-20℃储存）
02.
蛋白未正确表达/降解
靶蛋白低丰度表达富集难度较大，或样本处理中蛋白酶未完全抑制导致降解
解决方案
蛋白酶抑制：在裂解液中添加广谱蛋白酶抑制剂，提取蛋白需全程冰上操作。
裂解液调整：
▪对膜蛋白：改用含0.5% NP-40 + 0.1%脱氧胆酸钠的温和裂解液。
▪对易降解蛋白：添加1 mM PMSF和10 mM EDTA增强稳定性。
03.
结合条件不当
裂解液去垢剂浓度过高（如强RIPA裂解液中含1% SDS破坏蛋白相互作用）或盐浓度过高（破坏复合体稳定性）
解决方案
裂解液建议成分：常见的裂解液通常包含去垢剂、盐、缓冲液、蛋白酶抑制剂等。例如，NP-40或Triton X-100作为去垢剂，Tris-HCl或HEPES作为缓冲液，NaCl维持离子强度，EDTA抑制金属蛋白酶，还有蛋白酶和磷酸酶抑制剂。
详细适合的Co-IP裂解液成分，可参考推文
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