一、WB实验材料与实验明细

样本：293T cell lysis

电泳：预制胶（天地人和-SLE020，4-20%预制胶），160V-35min；

转膜：400mA（Yoche-YWT0500，Y-Tec快速转膜液(20×)），免冰浴转膜15min；

封闭：5min封闭（Yoche-YWB0501，Y-Tec 5min即用型封闭液），免洗直接孵育一抗；

一抗孵育：β-actin抗体（Immunoway-YM3028，β-actin鼠单克隆抗体），4度过夜孵育；

清洗：TBST 1X，洗涤3次，10min/次；

二抗孵育：1h（Immuoway-RS0001，Goat anti Mouse igG-HRP）孵育；

清洗：TBST 1X，洗涤3次，10min/次；

曝光：超敏ECL（YOCHE，PYT002）曝光。

总结：

得到3张同样样本的WB结果：对应为1-1，2-1，3-1

二、WB结束后进行膜再生

1.以上实验一完成后得到的3张膜，分别用三款不同膜再生液浸泡摇床孵育10min，用TBST 1X洗涤3次，10min/次，完成抗体剥离；

2.完全相同条件下，将完成抗体剥离的3张膜直接孵育二抗1h后ECL曝光。

3.总结：

1-2图：Y-Tec 抗体剥离膜再生液处理后检测无残留β-actin条带，剥离彻底；

2-2,3-2图：B品牌与E品牌均有检测到部分β-actin残留条带，剥离不彻底。

1.三张剥离后的膜完全按相同条件重新封闭后清洗，β-Tubulin一抗，二抗孵育后，ECL曝光；

2.总结：

1-3图：Y-Tec 抗体剥离膜再生液处理后，检测只有β-Tubulin条带，可以很好的保留膜上目的蛋白不剥离；检测无β-actin条带残留，剥离抗体彻底；

2-3,3-3图：B品牌与E品牌均能正常检测β-Tubulin条带，可以很好的保留膜上目的蛋白不剥离；能检测到部分β-actin目的条带残留，剥离抗体不彻底。