➽操作说明：

本试剂盒可以用于细胞因子等诱导的细胞增殖检测，也可以用于抗癌药物等对细胞有毒试剂诱导的细胞毒性检测，或一些药物诱导的细胞生长抑制检测。

1. 制作标准曲线：

1.1用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞；

1.2按比例依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做 5-7个细胞浓度梯度，每组 4-6 个复孔； 1.3接种后培养2-4小时使细胞贴壁，然后每100μL培养基加10μL CCK-8试剂培养一定时间后测定OD值，以细胞数量为横坐标，OD值为纵坐标，制作标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量。

2. 细胞活性检测：

2.1在96孔板中接种细胞悬液(100μL/孔)，将培养板放在培养箱中预培养24小时；

2.2向每孔加入10μL的CCK-8 溶液(注意不要产生气泡)；

2.3将培养板置于培养箱内孵育1-4小时；

2.4酶标仪450 nm 处测定吸光度。

3. 细胞增殖-毒性检测：

3.1在96孔板中接种细胞悬液(100μL/孔)，将培养板放在培养箱中预培养24小时；

3.2向培养板加入不同浓度的待测药物； 

3.3将培养板在培养箱孵育一段适当的时间；

3.4向每孔加入10μL的CCK-8溶液 (注意不要产生气泡)；

3.5将培养板置于培养箱内孵育1-4小时；

3.6酶标仪450 nm 处测定吸光度。

4. 计算公式细胞存活率：

=[(As-Ab)/(Ac-Ab)]×100%抑制率=[(Ac-As)/(Ac-Ab)]×100%

As:实验孔吸光度 (含细胞、培养基、CCK-8 溶液和药物溶液) ；

Ac:对照孔吸光度 (含细胞、培养基、CCK-8 溶液，不含药物) ；

Ab:空白孔吸光度 (含培养基、CCK-8 溶液，不含细胞、药物) 。

➽注意事项：

1.CCK-8的培养时间一般为1-4小时，但在培养30分钟左右即可取出肉眼观察显色程度，根据细胞种类而定，需要摸索条件，CCK-8的最佳反应时间以具体显色的最佳时间为准。

2.用96孔板进行检测时，如果细胞培养时间较长，一定要注意蒸发问题。

3.本试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化反应，所以还原剂 (例如一些抗氧化剂) 会干扰检测，如果待检测体系中存在较多的还原剂，需设法去除。

4.用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡，否则会干扰测定。

5.加入药物中如含有金属化合物或金属螯合物，对CCK-8显色有影响。

6.培养基中的酚红不会影响实验结果，酚红的吸光度可以在计算时，通过扣除空白孔中本底的吸光度而消除。

7.本产品可以检测Ecoli，但不能检测酵母细胞。向100μL培养液中加入10μL CCK-8溶液，并培养 1-4 小时或过夜。

8. CCK-8试剂对细胞的毒性非常低。它和活细胞内的脱氢酶持续反应使溶液颜色不断加深。

9. CCk-8检测时，建议同时测定细胞的具体数量，做标准曲线。

10.建议采用多通道移液器，以减小平行孔间的差异。

11.以下方法可以终止CCK-8反应(96 孔板)：

11.1.在显色反应后，将培养板放置4°C冰箱内。

11.2.每孔加10μL的0.1M HCl溶液。

11.3.每孔加10μL的1% (w/v)SDS (十二烷基硫酸钠) 溶液。

（注意：反应停止后，应在 24 小时内测定。）

➽储存条件及有效期：

4℃一年；-20℃两年，长期保存务必避光保存。

➽产品规格：

"CCK8检测试剂盒(Cell Counting Kit)"产品说明书下载